Chez Trypanosoma brucei, une famille de gènes connus sous le nom ESAG 1 (pour "Expression Site Associated Gene 1") codent pour une protéine, dont l’analyse de la séquence révèle qu’il pourrait s’agir d’une protéine transmembranaire pourvue d’un rôle de récepteur. La localisation de la partie transmembranaire dans la partie C-terminale de la chaîne détermine un court segment cytoplasmique de 37 acides aminés. D’autre part, la protéine possèderait dans sa partie extracellulaire une séquence hautement conservée caractéristique de site de liaison.

La partie intracellulaire comporte plusieurs motifs d’internalisation: deux motifs de type dileucine et un motif tétrapeptidique à tyrosine.

Le but de ce mémoire étant de vérifier que ces motifs peuvent capter certains des composants de nature protéique d’un extrait de cellule du protozoaire, nous avons procédé à la synthèse en phase solide, selon la stratégie Fmoc, de quatre peptides, reprenant chacun au moins un des motifs cités et allongés du côté N-terminal par une cystéine.

Au terme de ces synthèses et afin de tenter d’identifier les protéines cytosoliques susceptibles d’interagir avec les peptides, nous avons réalisé des chromatographies d’affinité sur Sepharose EAH 4B,munie au préalable d’un groupement maléimide via une réaction spécifique avec l’acide 3-(N-maléimido)propionique. Nous avons également utilisé comme phase chromatographique la Sepharose thiopropyl 6B. Les peptides couplés à ces deux types de matrice pourront adopter une même orientation par rapport à la phase que celle qu’ils devraient prendre par rapport à la membrane cellulaire au sein de la protéine entière, si le modèle est correct. Dès lors, nous avons procédé à l’incubation de ces résines-peptides en présence d’extrait.

Différents solvants d’élution ont alors été testés afin de procéder à un décrochage efficace du matériel protéique éventuellement lié aux peptides couplés sur les résines Sepharose. Les éluats sont analysés par électrophorèse sur gel de polyacrylamide en présence de SDS afin d’identifier les protéines d’intérêt.

-ESAG 1

-motifs d’internalisation

-peptide

-chromatographie d’affinité

-électrophorèse